又称免疫电聚焦。是电泳分析方法之一。实际上它是免疫扩散电泳和等电聚焦技术相联合的一种电泳分析方法。

性质

又称免疫电聚焦。是电泳分析方法之一。实际上它是免疫扩散电泳和等电聚焦技术相联合的一种电泳分析方法。具体操作大致有三种情况。（1）圆盘免疫等电聚焦是用聚丙烯酰胺凝胶柱先行等电聚焦，把微克量样品（如混合蛋白质）分开之后，把这凝胶柱条再包埋在具有缓冲体系的琼脂凝胶中，各蛋白随即扩散到琼脂胶内，并与抗血清槽（在琼脂胶板上）内扩散开的抗血甭（抗体）结合而成沉淀线；（2）把上述已分离的蛋白（在聚丙烯酰胺凝胶中）发刀下来填补在琼脂凝胶板的孔中，用双扩散试验法分析其中的特异性抗原；（3）像免疫电泳那样直接在玻片上作琼脂免疫等电聚焦。这一方法主要用于鉴定抗原。以免疫电泳优越之处在于能在选定的PH范围内完成蛋白（抗原）的分离，并提高了分辨力。

解释

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，当蛋白质放进此体系时，不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上，电聚焦的优点是：有很高的分辨率，可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开；一般电泳由于受扩散作用的影响，随着时间和所走的距离加长，区带越走越宽，而电聚焦能抵消扩散作用，使区带越走越窄；由于这种电聚焦作用，不管样品加在什么部位，都可聚焦到其电点，很稀的样品也可进行分离；可直接测出蛋白质的等电点，其精确度可达0.01pH单位。电聚焦技术的缺点是：一是电聚焦要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀，二是样品中的成分必需停留于其等电点，不适用在等电点不溶或发生变性的蛋白质。电聚焦技术要求有稳定的pH梯度，要求极防止对流和防止已分离区带再混合的措施，其办法有三：密度梯度，聚丙烯酰胺凝胶和区带对流聚焦，以第一种方法为常用。

相关词条

电泳、圆盘免疫、沉淀线、聚丙烯酰胺凝胶柱、蛋白、无盐溶液

参考资料

http://www.chemyq.com/xz/xz5/46464bglbj.htm

http://www.bbioo.com/blife/2007/17490.htm