1、五步蛇的柄息环境为陆生，但也有少数为树栖，不同种类蛇的栖息环境也有差异。五步蛇主要栖息在海拔400-700米的常绿和落叶混交林中，夏季喜欢在山坞的水沟一带活动，它们通常会选择在阴凉通风有树有水的地方生活，也在茶园、农田、柴堆内活动，能上树，也能进入人房。冬季多在树根形成的天然洞或旧鼠洞中越冬。
2、五步蛇年活动周期从惊蜇至大雪约为9个月，影响活动的主要因素为温度、湿度及食物。气温20-30℃时，活动最频繁，气温高达35-38℃时，多向水边集中。
3、野外的五步蛇通常以社鼠、犬足鼠、黄鼬及棘胸蛙为食。五步蛇在山坞的分布，和棘胸蛙的分布、数量有关系。因为会进入人房，所以也会以黄胸鼠为食。
4、繁殖期间雌蛇尾基部的臭腺分泌物有特殊臭味，以此来引诱雄蛇。交配前有追偶现象，交配时相互缠绕。要注意的是蛇交配时其性情要比平时暴躁，这时若遇外面的惊扰，会发出猛烈的攻击。多数母蛇会将卵产于天然的洞穴之中，洞道浅短干燥。产卵数目多少不等，年轻母蛇产卵早但数量少，年老母蛇产卵迟但数量多，一般为12-18枚。
5、五步蛇的冬眠期从大雪至翌年惊蛰约为3个月，越冬洞穴较深，蛇多时大小蛇在一起，有时也和蝮蛇混居在同一洞中。当气温为8℃时与蛇体表温度相等，当气温高于8℃时蛇体表温度始终比气温略低1℃，当气温低于8℃时蛇体表温度则较气温略高于1℃，蛇体表温度为11℃以上时能咬人。人工饲养的幼蛇，当气温低于17℃时盘瞳不动，在12℃时触动它们则会表现出张口欲咬人的状态。
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