随着婴儿与母亲情感联结的进一步建立，婴儿心理也出现了第二种形式的焦虑—分离焦虑，即婴儿与某个人产生了亲密的情感联结后，又要与之分离，就会表现出伤心、痛苦，拒绝分离。比如，一个8个月的孩子正坐在房间里玩玩具时，看见妈妈走出去，随着妈妈身影的消失，他大哭起来，这就是分离焦虑反应，研究证明，分离焦虑在婴儿6～7个月时产生，随着母一婴依恋的建立而同时发生。
分离焦虑的发展也是有个过程的，在头半年中，婴儿心理虽然当某个人如妈妈停止和他玩、离开时，他也可能哭，并且现在有一些研究证据表明，2个月的婴儿当他们的妈妈离开时，也会激动、不高兴，但是，在开始的几个月里， 婴儿的哭往往是由与另一个人的愉快交往的终止而带来的，且这时与任何一个人的交往的结束，都会带来婴儿的不高兴，这时，如果有另外一个人来跟他玩，婴儿能很快接受他的替代而安静，但是，6个月后，婴儿的反应明显不同于头半年：婴儿明显地、更多地抗拒特定个体——一般即为所依恋的对象，主要是母亲的离开，当母亲离开时，他们会非常不高兴、哭闹、不安；同时，他们不愿意再接受他人的替代，别人再跟他玩，他也一定要妈妈，这是婴儿心理社会性情感发展上的一个很大的转折。
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